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『奈米抗菌王』- 抗病毒技術及檢驗

『奈米抗菌王』新型複合材料對抗病毒效能試驗,已於美國FDA指定實驗室Microbac進行冠狀病毒(SARS)測試,且與日本前三大檢測中心Boken合作針對流感病毒進行實驗並與幹細胞臨牀醫學研究中心合作進行流感病毒腸病毒病毒測試通過,經過上述測試驗證可證實『奈米抗菌王』具有優異之抗病毒效能。以下詳細說明各項抗病毒測試與試驗結果。

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1.美國FDA指定實驗室Microbac進行冠狀病毒(SARS)測試說明:

摘要:

Microbac實驗室進行冠狀病毒(SARS)測試,依照國際標準規範ASTM E1052-11測試方法,進行SARS病毒與『奈米抗菌王』材料作用後之病毒培養液中殘留量。

病毒種類:

A.冠狀病毒 : SARS-associated Coronavirus(CDC 200300592),來自ZeptoMetrix/CDC病毒株。

B.宿主細胞:使用Vero E6細胞株(ATCC CRL-1586)。

 

『奈米抗菌王』新型複合材料抗病毒測試:

本測試依照ASTM E1052-11測試方法進行,在光照條件下同時進行未添加材料之病毒液與添加材料之病毒液培養最後判讀病毒感染情形。實驗測試分為樣品測試、病毒培養控制與中和劑有效性/病毒干擾與細胞毒性三部分,各別簡述如下:

1.樣品測試: 將測試材料與病毒液混合後以光源照射,加入中和劑後進行適當稀釋,最後進行病毒感染判讀。

2.病毒培養控制: 將稀釋培養液與病毒液混合後以光源照射,加入中和劑後進行適當稀釋,最後進行病毒感染判讀。

3.中和劑有效性/病毒干擾與細胞毒性:將測試材料與稀釋培養液混合後以光源照射,加入中和劑後進行適當稀釋,分成兩組進行中和劑有效性/病毒干擾確認與細胞毒性確認。其中中和劑有效性/病毒干擾為加入少量病毒液培養確認;細胞毒性則不加病毒液直接進行細胞毒性判讀。

4.計算出病毒抑制能力=抑制病毒量- 接種病毒量 。

5.初始病毒濃度數值(Log10 TCID50)為 7.28,『奈米抗菌王』材料在接觸20分鐘時間後減少病毒感染數值(Log10 TCID50)為 ≦3.61,減少病毒感染數值為≧3.67。

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2.台灣指標性醫學研究中心合作進行流感病毒、腸病毒測試說明:

摘要:

『奈米抗菌王』與幹細胞臨床醫學研究中心合作,針對『奈米抗菌王』新型複合材料對抗病毒進行以下測試:利用透明區斑點形成(Plaque Forming)方法,觀察經『奈米抗菌王』作用後之病毒培養液中殘留量。

病毒種類:

1.腸病毒 : 腸病毒伊科十一型,來自於美國病理學會能力試驗病毒株。

2.流感A型病毒 : A型流行性感冒病毒New Caledonia/20/99 (H1N1)來自於美國病理學會能力試驗病毒株。

宿主細胞:

1.A型流行性感冒病毒使用MDCK細胞株(BCRC 60004)。

2.腸病毒使用LLC-MK2細胞株(BCRC 60092)。

 

『奈米抗菌王』新型複合材料抗病毒測試:

本測試病毒種類分別為腸病毒與流感A型病毒,當細胞受到病毒感染後,細胞會死亡(如下圖所示),再利用MTT結晶染色方式測試細胞酵素活性對受質之作用效果,以此分析細胞存活率用以判斷抗病毒之效果,當測試材料對於抗病毒之效用越高時,其細胞存活率越高,而由於病毒與細菌不同無法直接量測,因此用細胞感染形成病毒斑(Plaque)之方法,計算病毒斑形成單位(PFU; Plaque-forming unit)為病毒濃度之判斷,其單位為PFU/Ml。

由下圖可清楚看出當細胞受到病毒感染死亡後,藉由MTT結晶染色方式可看出活體細胞與死亡細胞的差異。

細胞存活率.jpg

以下先針對未添加任何材料之情況下,接種不同病毒時細胞存活率測試。

病毒接揰細胞存活率.jpg

以上抗病毒測試,皆依照美國FDA認證之實驗室MICROBIOTEST針對抗病毒所使用之認證規範ASTM E 1052-96,依此方法與幹細胞臨牀醫學研究中心合作進行測試並計算出病毒抑制能力=抑制病毒量÷接種病毒量。

1.以2×106 PFU/mL病毒濃度測試,『奈米抗菌王』有抑制腸病毒感染LLC-MK2細胞效果,抑制能力達99.99%。

2.以4×103 PFU/mL病毒濃度測試,『奈米抗菌王』有抑制A型病毒病毒感染MDCK細胞效果,抑制能力達99.99% 。

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3.Boken-大阪微生物實驗室進行流感病毒(H1N1)測試,依照國際標準規範ISO 21702結合 JIS R 1702 之光照條件建立測試方法,進行H1N1病毒『奈米抗菌王』作用後之抗病毒活性值。

 

病毒種類:

流感病毒 : A型流感病毒Influenza A Virus (H1N1) (ATCC VR-1469) 。

 

『奈米抗菌王』抗病毒測試以下表格為ISO 21702規範測試相關條件:

病毒測試-日本h1n1.jpg

                        

                                     資料來源: Boken

測試光源條件如下:

光源種類:黑光螢光燈20W 2管(TOSHIBA FL20S BLB)

照光條件: 0.25mW/cm2*4小時 (25± 5℃)

病毒感染值量測方式: Plaque assay(空斑法) 抗病毒活性值定義如下圖:

1625205361254_2x.jpg

『奈米抗菌王』抗病毒依上述條件進行測試其數據結果為對照測試樣品病毒感染對數值為 4.76,『奈米抗菌王』材料測試樣品病毒感染對數值為 2.54,抗病毒活性值為2.2。

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